DNA轉(zhuǎn)染是一種重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，在基因研究和基因治療等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用，外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析；外源性DNA既可以整合至細(xì)胞染色體，也可以作為游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源性DNA整合至染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過一些選擇性標(biāo)記反復(fù)篩選，以得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。
DNA轉(zhuǎn)染的使用注意事項(xiàng)：
1.細(xì)胞狀態(tài)：選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，確保細(xì)胞生長旺盛，容易轉(zhuǎn)染。細(xì)胞狀態(tài)不好會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下。
2.轉(zhuǎn)染試劑：不同的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)條件可能需要不同的轉(zhuǎn)染試劑和優(yōu)化條件。應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來確定轉(zhuǎn)染條件。
3.DNA質(zhì)量：用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA必須無蛋白質(zhì)、RNA和其他化學(xué)物質(zhì)的污染。同時(shí)，確保質(zhì)粒OD值A(chǔ)260/A280比值應(yīng)在1.8以上，以保證DNA的純度。
4.培養(yǎng)基血清：在開始準(zhǔn)備DNA和陽離子脂質(zhì)體試劑稀釋液時(shí)使用無血清的培養(yǎng)基。因?yàn)檠鍟绊憦?fù)合物的形成。但陽離子脂質(zhì)體和DNA-陽離子脂質(zhì)體試劑的復(fù)合物在形成時(shí)，對血清的存在不太敏感。
5.抗生素使用：在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用抗生素，因?yàn)榭股貢档图?xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，在篩選抗生素加入前至少要留出24-48h。
DNA轉(zhuǎn)染的測定步驟涉及多個(gè)環(huán)節(jié)，每一步都需要仔細(xì)操作以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。同時(shí)，在使用該技術(shù)時(shí)還需要注意多個(gè)方面，遵循這些注意事項(xiàng)可以提高轉(zhuǎn)染效率、減少細(xì)胞損傷并確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
